如何解决PCR实验室污染检测?
时间:2022-08-10 02:08:00 点击:389次
PCR实验室实验反应的特点是扩展能力大,敏感性高,但头痛容易污染,极少量污染可导致假阳性。面对样品交叉污染、试剂仪器交叉污染、复制质粒污染等诸多污染源,PCR扩大产品污染,容易忽视气溶胶污染,气溶胶是由固体或液体小质量分散和悬浮在气体介质中的胶体分散系统,在气体和液体表面摩擦中,如操作剧烈摇晃反应管,打开盖、抽样和污染进样枪反复抽样可产生气溶胶和污染。这样的污染来的悄无声息,防不胜防。
尽管这些污染是正确的PCR实验结果的影响受到了广泛的关注,其中大部分已被广泛关注PCR实验室采取了各种污染控制方法,如定期清理、划分作业区域、分装试剂、操作谨慎、重复试验、多角度验证结果等。但是微量的核酸片段就能被扩增,所以对污染物的控制不仅仅是做到这些就能够杜绝和避免的,关键是需要从源头控制。目前多数生物试验室,分子实验每天都在大规模进行,污染源已经无处不在。特异性的,非特异性的,同源的,非同源的,广泛分布在样本容器、实验室台面,试剂溶液中、仪器表面内管附着等等。以下就是为了清除这些污染源研究出来的方法:
解决PCR实验室检测被污染的方法
1.酒精擦拭:将核酸沉淀,确保在一定程度上减少被污染的表面(简单).方便.成本低)。
2、修饰:标记遗传物质,阻止聚合酶与核酸的结合,从而抑制DNA扩散(效果相对较好)。
3.酶解:酶可以将长链中的核酸分子降解成小块(速度快).效果比较好)。
4、高压变性:高压可以将核酸降解成20-30bp的小片段(彻底、成本低)。
5、紫外照射:PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,延伸终止(方便、范围广、成本低)。
有实验室的地方,就不可避免的会出现实验室污染。实验室污染不仅会影响试验和科研的质量和效果,还会损害实验室工作人员的健康。一个好的PCR实验室,应当时刻注意污染的监测,考虑有无污染、是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。